技術文章
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蛋白電泳（PAGE）
2010-02-27蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡稱TEMED）和催化劑過硫酸銨（簡稱AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡稱PAGE）S...
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胍鹽/β-巰基乙醇法
2010-02-02胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實驗全程中可以抑制RNase的活性，保護RNA不被降解。
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異硫氰酸胍/苯酚法
2010-02-02異硫氰酸胍/苯酚法異硫氰酸胍/苯酚法是一種傳統的RNA提取方法，適用于大部分動植物材料，但對于次生代謝產物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚/氯仿混合液抽提，低pH值的酚將使RNA進入水相，而蛋白質和DNA仍留在有機相，從而可以完成RNA的提取工作。Solarbio公司的Trizol和總RNA...
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DNA的儲存
2010-02-02DNA的儲存儲存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強的緩沖對）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價金屬陽離子，抑制DNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲存液，但有...
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基因組DNA提取的原則
2010-02-02基因組DNA提取的原則1、保證核酸一級結構的完整性（因為遺傳信息全部儲存在核酸一級結構中，故完整的一級結構是保證核酸結構與功能研究的基礎）。2、排除其它分子（如蛋白質、多糖、脂類、有機溶劑等）的污染，使下游試驗順利進行。
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RNA純化及獲得
2010-01-26RNA純化及獲得純化要求RNA樣品中不應存在對酶（如逆轉錄酶）有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染。排除DNA分子的污染。純化方法及沉淀1、有機溶劑抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取試劑進行RNA提取時，常使用氯仿進行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質，并促進水相與有機相的分離，從而達到純化RNA的目的。沉淀：氯...
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RNA評價與鑒定
2010-01-26RNA評價與鑒定提取得到RNA溶液后，我們需要對RNA進行相關的質量檢測，以確定它是否符合后續實驗的要求。RNA用于不同的后續實驗，對其質量要求不盡相同。cDNA文庫構建要求RNA完整且無酶等抑制物殘留；Northernblot實驗對RNA完整性要求較高，對酶反應抑制物殘留要求較低；RT-PCR實驗對RNA完整性要求不太高，但對酶反應抑制物殘留要求嚴格。因此...
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RNA的保護
2010-01-26RNA的保護與DNA提取實驗相比，RNA的提取實驗常常較為困難，這主要是由于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因來自內因和外因兩個方面。內因：RNA核糖殘基的2’和3’位置帶有羥基，易被水解；外因：生物體內和外部環境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，高溫后仍然能夠正確折疊恢復活性。因此，從樣品的儲存、RNA的提取以及RNA提取完成后的保存，...
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細胞從培養皿上的解離
2010-01-18細胞從培養皿上的解離以下通用步驟可以在保持細胞完整性的同時從培養器皿中分離多種細胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細胞系。應通過實驗來確定不同體系所需的佳條件和濃度。?在傳代培養時監測細胞存活率。?細胞存活率應大于90%。?對于無血清培養基，建議降低胰酶用量。1．去除器皿中原有細胞培養基。2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到培養瓶中與...
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原代組織細胞的解離
2010-01-18原代組織細胞的解離從原代組織上獲取單個細胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細胞的時間，以獲得高的存活率。按下面的方法解聚整個組織，以獲得大量細胞。胰酶1．先去除無關組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進行重懸來清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復清洗2-3次。2．將裝有組織碎塊的容...
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深低溫保藏細胞的解凍
2010-01-18深低溫保藏細胞的解凍深低溫保藏的細胞十分脆弱，要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏的細胞，然后直接將其接種到*生長培養基中，如果細胞對抗凍劑（DMSO或甘油）特別敏感，則離心除去抗凍劑，然后將細胞接種到*生長培養基中。下面是深低溫保藏細胞的建議解凍步驟：直接接種法1．從凍存管中取出細胞，用37℃水浴快速解凍。2．將細胞直接接種到*生長培養基中。每毫升凍存細胞需要1...
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使用抗生素和抗真菌素進行去污培養
2010-01-18使用抗生素和抗真菌素進行去污培養當不可替代的培養細胞發生污染時，研究人員可以嘗試消除或控制污染。首先，確定污染類型是細菌、真菌、支原體還是酵母。將污染的培養物與其他細胞系隔離。實驗用消毒劑清洗培養箱和層流通風櫥，檢查HEPA（粒子空氣）過濾器。高濃度的抗生素和抗真菌素可能對某些細胞系有毒害作用。因此，應測定劑效關系以確定抗生素和抗真菌素的毒性劑量。這一點在使...
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DNA產物純化試劑盒簡介
2010-01-11DNA產物純化試劑盒簡介：對于TA克隆、酶切或者直接測序等試驗來說，純化PCR產物或酶切產物是非常必要的。以TA克隆為例，其成功率跟目的片段的純度高低具有重要關系。雖然未經過純化的PCR產物也可以跟載體連接，但會增加篩選陽性克隆的難度，因為PCR產物中的dNTP和引物等可能也會跟載體連接。在進行連接試驗時，這些非特異性的產物會跟特異性產物相互競爭，從而導致連...
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質粒提取試劑盒簡介
2010-01-11質粒提取試劑盒簡介：質粒（Plasmid）是一種染色體外的穩定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環的DNA分子，并以超螺旋狀態存在于宿主細胞中。質粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數，并表達所攜帶的遺傳信息。質粒提取原理及流程：較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如...
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基因組DNA提取試劑盒簡介
2010-01-11基因組DNA提取試劑盒簡介：DNA是遺傳信息的載體，是重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要對象，為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構建等試驗，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術中重要、基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒，如植物、動物、細菌、細胞、血液、...