BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒 說(shuō)明 技術(shù)文章

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BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒

商品貨號(hào)：QS3202
英文名稱：BCA Protein Assay Kit
別名：BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒
檢測(cè)方法：常量法

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測(cè)定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測(cè)定原理：

堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰大。

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

貨號(hào): QS3202           規(guī)格：50 管/48 樣

   BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) 可見(jiàn)分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定，

測(cè)定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量 分析。

測(cè)定原理：

堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將 Cu2+還原成 Cu+； 2 分子的 BCA 與 Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 處吸收峰大。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑 A：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑 B：液體 1mL×1 支，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)蛋白：液體 2 mL×1 支，4℃保存。

工作液配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×1 mL），將試劑 A 和 B 按照 50：1 的比例混合，蓋緊后充分混勻。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

1. 液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液（自備），根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水） 冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測(cè)液。

3. 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 562 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min。 

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。

計(jì)算公式：

Cpr (mg/mL) = C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管） = 0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）

Cpr (mg/g)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W = 0.5×（A 測(cè)定管－A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷ W

W: 樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒，適用于測(cè)定蛋白濃度在 20-5000μ g/ml 樣品。測(cè)定前取 1-2 個(gè)樣 做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若 A 測(cè)定管－A 空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定，以確保測(cè)定的準(zhǔn) 確性。