檸檬酸合酶試劑盒基礎(chǔ)介紹

　　一、檸檬酸合酶(CS)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，是細(xì)胞內(nèi)多種代謝途徑的關(guān)鍵限速酶及代謝變化的標(biāo)志酶，具有高度底物特異性，僅催化乙酰CoA和草酰乙酸縮合生成檸檬酸和輔酶A，作為三羧酸循環(huán)第一個限速酶，是該途徑主要調(diào)控位點之一。檸檬酸合酶催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A，進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸，DTNB轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的TNB，產(chǎn)物在412nm處具有特征吸收峰，根據(jù)吸光值變化即可表征檸檬酸合酶的活性。
 

　　二、使用前每支加入500µL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存)；使用前每支加入1.5mL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存)。測定過程中所需要的儀器和試劑：可見分光光度計、1mL玻璃比色皿(光徑10mm)、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
 

　　三、推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本質(zhì)量計算，則需加測胞漿提取物CS活性，上清(胞漿提取物)和沉淀(線粒體)酶活之和即為總酶活；準(zhǔn)確在10s和130s處完成讀數(shù)，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性；測定過程中待測樣本和所有試劑須冰上放置，以免變性和失活；計算?A測定=A2測定-A1測定，?A對照=A2對照-A1對照，?A=?A測定-?A對照。