IgM捕捉ELISA法
更新時(shí)間：2009-12-31 | 點(diǎn)擊率：4392
IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測(cè)出血熱IgM抗體
本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體，加辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物，用以檢測(cè)出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究。本試劑盒為96人份/包裝。
試驗(yàn)材料：
（1）抗人IgM抗體（μ鏈）：用pH9.5的包被液包被酶標(biāo)板
（2）凍干陽(yáng)性血清/凍干陰性血清1支， 0.2ml/支，工作濃度為1：10；
（3）凍干辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1支， 0.5ml/支，工作濃度為1：20；
（4）凍干小牛血清1支，1ml/支；
（5）濃縮洗液（10倍濃縮）1瓶，50ml；（標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液）；
（6）A/B顯色液和終止液各1瓶。
（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用，余下的放-20℃保存）
（7）終止液：4N H2SO4
（8）酶標(biāo)儀。
檢測(cè)步驟：
（1）將待檢血清用稀釋液100倍稀釋，加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標(biāo)板一孔中，100μl/孔，同時(shí)加入已1：10稀釋的陽(yáng)性血清/陰性血清對(duì)照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小時(shí)。
（2）棄去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。
（3）將凍干辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1：10稀釋后，加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi)，100μl/孔，37℃水浴孵育1小時(shí)。
（4）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干。
（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘。
（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔，一滴/孔。
結(jié)果判斷：
（1）目測(cè)方法：
陽(yáng)性對(duì)照孔呈明顯藍(lán)色，陰性對(duì)照孔呈無(wú)色，對(duì)照成立；若待檢血清孔呈明顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色（TMB），則標(biāo)本為出血熱IgM抗體陽(yáng)性，反之陰性。
（2）酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)：
于450nm（TMB）陽(yáng)性對(duì)照孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值,即P/N≥2.1，對(duì)照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對(duì)照孔OD比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM抗體陽(yáng)性，反之陰性。
（陰性對(duì)照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）
意義：
陽(yáng)性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。