Calcein-AM 是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，發綠色熒光（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在傳統的 Calcein（鈣黃綠素）基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后，Calcein-AM（本身不發熒光）被細胞內的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子 Calcein，從而被滯留在細胞內并發出強綠色熒光。與其它同類試劑（如 BCECF-AM 和 CFDA)相比，由于 Calcein, AM 細胞毒性極低，是更適合用于活細胞染色的熒光探針，而且不會抑制任何的細胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。
      由于死細胞缺乏酯酶，Calcein-AM 僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標記。因此，Calcein-AM 常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯合使用，同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過活細胞的細胞膜，僅能穿過死細胞膜的無序區域而到達細胞核，并嵌入細胞的 DNA 雙螺旋從而產生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI 僅對死細胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激發，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用 545 nm 激發，僅可觀察到死細胞。
     本試劑盒的工作原理就在于 Calcein-AM 和 PI 的雙重染料，來進行活細胞和死細胞的雙重染色標記，從而進行活細胞和死細胞水平的分析。根據我司優化的實驗體系，單次就 200µl 細胞懸液進行染色，可以做 500 次檢測